рефераты скачать

МЕНЮ


Дипломная работа: Изучение устойчивости перспективных сортов картофеля к болезням разной природы происхождения и их влияние на урожайность в условиях Кемеровской области

2.3.1 Диагностика вирусных и бактериальных болезней картофеля методом иммуноферментного анализа

Главной задачей при получении достаточного количества оздоровленного материала является проведение исследований на заражённость вирусными и бактериальными болезнями.

Использование иммуноферментного анализа даёт наиболее точный результат. Техника проведения анализа отработана в лаборатории биотехнологии картофеля КемНИИСХа по использованию иммуноферментного диагностического набора для определения вирусов и бактериозов.

Иммуноферментный анализ протекает поэтапно.

Первый этап. В лунки вносится раствор со специфическим антителом X;Y;A;Rw; вирусом и бактериозом Чн, Кг.

Второй этап. Антитела вирусов X;Y;A;Rw; вирусом и бактериозом Чн, Кг соединяются с ранее закрепившимися антителами, образуется соединение “антитело-антиген”.

Третий этап. Соединение реагирует с антителом АР – коньюгат, при этом образуется, так называемый “сэндвич - варианта”- двойное тело.

Четвёртый этап. Происходит ферментативная реакция окисления ортофенилдиамина кислоты с помощью кислорода, отцепленного от перекиси водорода с образованием продуктов с высоким коэффициентом эксенкции. Ели в тестируемом материале есть вирус, то получается комплекс из “ антитела – вирус – антитела - фермента”. В результате ферментативной реакции с субтратом развивается ярко оранжевая окраска, определяющаяся как инструментально, так и визуально.

В состав набора, рассчитанного на проведение 1000 анализов, входят 10 реагентов: покровный буфер, промывочный буфер, субстратный буфер, ортофенил – недиамин, высокоспецифические антитела, иммунопероксидазный коньюгат, перекись водорода, положительный контроль, бычий сывороточный альбумин, детергент и полистирольные платы.

Покровный буфер А применяется для разведения антител. Содержимое флакона с этикеткой покровного буфера растворяют в 100 мл дистиллированной воды или берут точно навески: Nа – 1,59 г; NаНСО3 – 2,93 г, растворяют в дистиллированной воде, доводят объём до 1000 мл в мерной колбе, замеряют рН, которая должна быть 9,6.

Для промывочного буфера берут точно навески: NаСl -8 г; КН2 РО4 – 0,2 г; NаНРО4 + 12 Н2О – 2,9 г; KCl – 0.2г. Навески объединяют и растворяют в мерной посуде, доводят до объёма 1000 мл, при рН – 7,4. Добавляют 0,5 мл детергента “TWEEN-20”. Раствор готовится в двойном объёме один для промывки, другой для буфера “С”.

Буфер “С” – для проб и коньюгатонтов готовится из буфера “В”. В буфер “В” добавляется бычий сывороточный альбумин из расчёта 1,0г на 250 мл буфера. Размешивается до полного растворения. Раствор “С” используется свежеприготовленным.

Субстратный буфер “Д” состоит из четырёх компонентов, Nа2НРО4,

12Н2О – 9,16г, лимонная кислота, субстрат -4 мл на 100 анализов. Перекись водорода, 3% раствор – 0,5 мл на 10 мл готового субстрата. Положительный контроль. Содержимое флакона с этикеткой “положительный контроль” растворяется в 1 мл буфера “С”. Вносится по 0,1 мл/100 мкл. Для субстрата и субстратного буфера нужна тёмная посуда [14] .

2.3.2 Методика проведения исследований на грибную инфекцию

Учёт грибных болезней в поле проводится по методике апробации картофеля в следующие сроки: первый - в период всходов, когда растения достигают высоты 15-20 см (ризоктониоз); второй – во время бутонизации - массового цветения картофеля (ризоктониоз, фитофтороз, альтернариоз, грибные увядания); третий – за две – три недели до уборки, когда ещё можно отличить здоровую ботву от поражённой, или перед уничтожением ботвы (фитофтороз, ризоктониоз, в том числе грибные увядания).

При практическом учёте болезней растений в производственных условиях в пробе определяют не только вид заболевания, но и степень поражения в соответствии с разработанными шкалами:

Фитофтороз и альтернариоз:

9 баллов. Симптомы поражения отсутствуют;

8 баллов. Поражение может составлять от 1 до 10% поверхности листьев в виде единичных пятен на отдельных растениях;

7 баллов. Поражается от 10-25% поверхности листьев (симптомы могут отличаться почти на всех листьях, но кусты сохраняют нормальную форму);

5 баллов. От 25-50% поверхности листьев растений (поражено каждое растение, но цвет куста остаётся зелёным);

3 балла. Поражается более 50% площади листовой поверхности всех растений (доминирует бурый или зелёный цвет, но стебли остаются зелёными);

1 балл. Все листья растений полностью поражаются, стебли погибают или погибли.

Ризоктониоз (ростки, подземная часть). Степень поражения ростков, подземной части растений ризоктониозом устанавливается по шкале:

9 баллов нет поражения;

7 баллов (0%) пятна единичные, поверхностные, не более 1/4 длины ростка, подземной части стебля;

5 баллов (25-50%) язвы глубокие, охватывающие всю окружность и до 1/ 2 длины ростка, стебля;

3 балла (50%) язвы глубокие, охватывающие всю окружность и более 1/ 2 длины ростка, стебля приводящие к частичному увяданию стебля и поражению листьев;

1 балл (полное поражение растений), загнивание ростка, нижней части стебля, корней, приводящее к полному увяданию и гибели растений.

Парша обыкновенная, ризоктониоз (клубни). Развитие парши обыкновенной и ризоктониоза определяют по 9 – бальной шкале, где 9 баллов – здоровый клубень, а 1 балл – язвы парши занимают более 50% поверхности клубней и склероции ризоктониоза 15 – 25 % [12] .

2.3.3 Методы определения нематод

Способ промывания. Пробу почвы без предварительного просушивания помещают на металлическое или капроновое сито с диаметром ячеек 2-3 мм вставленное в сито с ячейками 0,1- 0,2 мм и промывают сильной струёй воды до тех пор, пока вода, вытекающая из-под сита, не станет прозрачной. На верхнем сите задерживаются крупные частицы, а на нижнем цисты и мелкие частицы. Нижнее сито можно просматривать непосредственно под бинокуляром или смывать осадок в чашки Петри, где смотрят на наличие цист [8].

Анализ образцов клубней и других корнеплодов на приставшие к ним цисты проводят с помощью аппаратов-выделителей цист, описанных выше, но при этом пользуются большими приёмными воронками ёмкостью 8-10 л. Воронку снабжают крупноячеистым ситом, вставляют в треногу над сосудом-смесителем и заполняют клубнями. Промывают картофель струёй воды. Весь последующий анализ проводят, как и анализ сметок. При отсутствии указанных аппаратов клубни моют в тазах или ведрах. Смыв фильтруют, после чего цисты отбирают с фильтров [23].

Для коллекционного питомника подбирался участок, типичный по почвенно-климатическим свойствам для данной зоны. Предшественник - занятый сидеральный (донник) пар. Агротехника в опыте - общепринятая для первичного семеноводства по голландской технологии.

Расположение делянок в опыте – рендомизированным методом, повторность – трехкратная.

Посадка производилась в гладкую поверхность почвы четырёхрядными сажалками с маркерами фирмы “ Крамер” с шириной междурядий 75 см х 40 см. Уборку проводили подкапывающей техникой. Стандартами испытания служили районированные сорта картофеля, в группе ранних использовался сорт Белоярский ранний, среднеранний сорт Невский. Коллекционный питомник высаживался по схеме, где стандарты высаживаются парным дантиль – методом: через каждые два испытываемых сорта, высаживается стандарт. Делянки испытания четырёхрядковые, по 20 кустов в ряду, повторность однократная, согласно методическим указаниям по технологии селекционного процесса картофеля.

Опрыскивание фунгицидами против болезней не проводилось. Уборка в питомнике проводилась вручную с применением подкапывающей техники. В период вегетации велись фенологические наблюдения за ростом и развитием растений картофеля. На 65-й день после посадки бралась проба на скороспелость: с делянки выкопали по три куста. Определяли скороспелость (ранний урожай) в граммах на куст. Проводили определение структуры урожая . Непосредственно перед уборкой выкапывали: по 3 куста. Урожай взвешивали и учитывали. После уборки взятые пробы разбирали в хранилище на две фракции: товарные (свыше 40 г) и нетоварные (до 40 г). Определяли общее количество клубней на 1 куст, в том числе количество товарных, среднюю массу клубня товарного. Собственно урожай картофеля с каждой делянки в отдельности учитывается после прополки и взвешивания оставшейся.

После определения массы и структуры урожая товарные клубни оценивали на поражённость болезнями и наличие физиологических трещин. Поражённость сортов фитофторой учитывался по проценту пораженных клубней этим заболеваниям. Устойчивость клубней к ризоктониозу и парше обыкновенной определялась по девятибальной шкале:

9 баллов- клубни здоровы.

7 баллов- клубни слабо поражены (склероции ризоктонии и язвы парши встречаются единично, но не более 3-х крупных и 5-ти мелких).

5 балов- клубни средне поражены (склероции ризоктонии и язвы парши встречаются свыше 3-5, но не более 10-12.

3 балла- клубни сильно поражены ( более 10-12 штук склероциев и язв парши и они нередко сливаются между собой).

По каждому образцу вычислялся средний балл устойчивости.

Устойчивость ботвы к болезням (фитофтороз, макроспориоз, ризоктониоз, вирусы) определялась визуально в полевых условиях на естественном фоне. Визуальный учёт вирусных болезней осуществлялся в период массового цветения данного сорта. Каждый вид вирусного заболевания (крапчатость, морщинистая мозаика, скручивание, полосчатая мозаика, готика, закручивание) учитывался отдельно. Процент поражения определялся для каждого заболевания, а также суммарно. В случае сильного поражения растений вирусными заболеваниями испытатель может снять такой сорт с испытания, уведомив об этом филинатора. При появлении и развитии фитофтороза на участке проводился учёт устойчивости растений за 10-12 дней до уборки, визуально, по 9 балльной шкале устойчивости.

9 баллов- очень высокая устойчивость – отсутствие пятен фитофторы на листьях.

8 баллов- единичные пятна на отдельных листьях- высокая устойчивость.

7 баллов- поражено до 25% листьев куста – относительно высокая устойчивость.

5 баллов- поражено от 25 до 50% листьев – средняя устойчивость.

3 балла- поражено более 50% листьев- низкая устойчивость.

1 балл- все листья растения полностью поражены – очень низкая устойчивость.

В процессе проведения опыта определяли также содержание крахмала и сухого вещества в клубнях картофеля. Для этого из средней пробы клубней вырезают в продольном направлении восьмушку и тонко измельчают, хорошо перемешивают, отбирают 2-3 параллельные пробы (весом по 20 г) в предварительно высушенные бюксы, снова взвешивают на весах ВЛТК – 500 или на аналитических весах. Затем бюксы с открытой крышкой помещают в сушильный шкаф на 7 часов при температуре 100-105 С. Затем их охлаждают в эликсаторе и взвешивают. Далее снова помещают в сушильный шкаф на 2-3 часа и снова взвешивают. Сушка считается оконченной, если вес бюксов с навеской не изменяется, т.е. они достигают постоянного веса.

В опыте исследовались перспективные сорта отечественной и зарубежной селекции. Ниже приводится характеристика некоторых сортов, в том числе выведенных в КемНИИСХ.

Алёна. Интенсивного типа выращивания, столового назначения, куст средней высоты, раскидистый. Листья тёмно- зелёной окраски, плотные, глянцевые, цветение среднее, растянутое, обычно с быстрым опадающим бутоном. Очень ранний сорт, созревает за 55-60 дней. Устойчив к фитофторе, раку картофеля и нематоде типа А. Урожайность до 400 ц/га. Содержание крахмала 15-18%. Пригоден для приготовления чипсов и хрустящего картофеля. Масса товарного клубня 85-150 г., клубни округлой формы с поверхностными глазками. Цвет глазной кожуры и мякоти меняется по степени созревания до жёлтой. Сорт имеет отличные вкусовые качества и варится за 5 минут. Лёжкость хорошая, однако, необходимо учитывать, что этот сорт не имеет периода покоя и требует соблюдения температурного режима при хранении [4].

Agria. Универсального назначения. Цветки белые. Клубни длинноовальные, жёлтого цвета, мякоть жёлтого цвета. Глазки поверхностные. Урожайность 200-320 ц/га. Содержание крахмала 8,1-16,4%. Вкус хороший. Товарность клубней 84,6-96,5%. Лёжкость - 76-85%. Сорт устойчив к раку картофеля, к картофельной нематоде, восприимчив к фитофторозу и парше обыкновенной, средне поражается скручиванием листьев, слабо мозаикой [4].

Angella. Среднеспелый сорт. Устойчив к раку картофеля, к обыкновенной нематоде, среднеустойчив к фитофторозу, парше обыкновенной и к вирусным болезням. Товарность клубней 66-96%. Содержание крахмала - 15,4-17,3%. Клубни жёлтые, овальные, глазки мелкие, мякоть жёлтая. Куст высокий, хорошо облиственный. Лист среднерассечённый. Цветки бледно-фиолетовые, ягод не образует. Урожайность 300-350 ц/га [4].

Белоярский ранний. Урожайность достигает 300-400 ц/га. Сорт раннеспелый. Столового назначения, клубни удлинённо-овальные, красного цвета. Цветки белые, цветёт обильно. Глазки поверхностные, мелкие. Содержание крахмала 12-14.5%. Обладает хорошей лёжкостью. Сорт устойчив к раку картофеля, парше обыкновенной, к вирусным болезням, неустойчив к золотистой картофельной нематоде [4].

Сорт Невский - интенсивного типа выращивания, отзывчив на повышенные дозы удобрений. Куст невысокий, компактный, прямостоячий, хорошо облиственный. Листья средней величины, светло-зелёные, матовые. Цветки белые, цветение обильное. Сорт обладает устойчивостью к вирусным заболеваниям. Относится к группе среднеранних, выведен путём гибридизации в Северо – Западном НИИСХ. Созревает за 85 – 90 дней. Потенциальная урожайность до 65 т/га. Содержание крахмала 11-15%. Клубни округло - овальной формы, слегка приплюснутые. Кожура гладкая, белая, глазки мелкие, розовые, мякоть клубня белая [4].

Сорт устойчив к раку, относительно устойчив к вирусам, ризоктониозу, среднеустойчив к фитофторозу, парше обыкновенной, неустойчив к золотистой картофельной нематоде. Плохо переносит обламывание ростков перед посадкой. Клубни картофеля устойчивы к механическим повреждениям, обладают хорошей лёжкостью.

Сорт Накра - создан в результате творческого сотрудничества Нарымской селекционной станции, ВНИИКХ и Кемеровского НИИСХ методом гибридизации и отбора из гибридной комбинации 596 -79 Зарево. Среднеспелый, универсального назначения. Средний урожай – 25,2 т/га, максимальный 37,8 т/га, получен в 2002 г. Цветки красно–фиолетовые, клубень овально–округлый, окраска кожуры красная, поверхность гладкая. Окраска мякоти светло-жёлтая, глазки средней глубины [4].

Сорт отличается повышенным содержанием крахмала -18-23% (на Мариинском ГСУ в 2001г оно составило – 24,7%), характеризуется относительной устойчивостью к фитофторозу (7-8 баллов) и высокой устойчивостью к парше обыкновенной (8-9 баллов), неустойчив к золотистой картофельной нематоде. Обладает хорошей лёжкостью [4].

Любава - выведен в КемНИИСХ. Ранний. Столового назначения. Растение средней высоты, куст компактный. Цветки фиолетовые. Окраска клубней красная, кожура сетчатая, форма клубня овально-округлая, мякоть белая. Глазки средней глубины. Потенциальная урожайность до 55 т/га. Масса товарного клубня 110-210г. Содержание крахмала 12-16%. Вкусовые качества средние и хорошие. Устойчив к раку. Относительно устойчив к фитофторозу и вирусам, неустойчив к золотистой картофельной нематоде. Отзывчив на внесение удобрений и полив. Обладает увеличенным периодом покоя [4].

Кемеровский - выведен в КемНИИСХ. Среднеспелый. Столового назначения. Растение средней высоты. Окраска цветов белая. Окраска клубней и мякоти белая, форма клубней округло-овальная, глазки глубокие. Потенциальная урожайность до 50 т/га. Масса товарного клубня 100-180 г. содержание крахмала 13-16%. Вкусовые качества хорошие. Средневосприимчив к фитофторозу и вирусам. Неустойчив к раку и золотистой картофельной нематоде. Жаровынослив и засухоустойчив. Положительно отзывается на орошение [4].

Дачный (1219-97) - выведен в КемНИИСХ. Среднеранний. Столового назначения. Куст средней высоты, компактный. Цветки белые. Окраска клубней жёлтая, форма овальная, мякоть клубня жёлтая. Глазки поверхностные. Потенциальная урожайность до 50 т/га. Масса товарного клубня 120-140 г. содержание крахмала 12-15%. Вкусовые качества хорошие. Устойчив к раку. Неустойчив к золотистой нематоде. Относительно устойчив к фитофторозу, парше обыкновенной, альтернариозу [4].


Глава 3. Основная часть

3.1 Распространение золотистой картофельной нематоды в Кемеровской области

По состоянию на 01.01.2006 года в области зарегистрировано 4162 очага заражения золотистой картофельной нематодой в частном секторе, 77 сельских населенных пунктах и 4 городах и в общественном секторе, на полях 5 хозяйств. Всего карантин по золотистой картофельной нематоде наложен в десяти районах области. Зараженная площадь приусадебных участков составляет 404,136 га. Площадь заражения земель общественного сектора - 390 га.

В 2004 - 2005 году проведено первичное обследование посадок картофеля на землях общественного сектора в следующем объёме (таблица 2).

Таблица 2. - Обследование посадок картофеля на выявление золотистой картофельной нематоды на землях общественного сектора, Кемеровская область 2004-2005 гг.

Обследовано Всего Из них силами инспекции
2004г. 2005г. 2004г. 2005г.
Районов 12 8 12 8
Хозяйств 28 26 28 26
в т.ч. семеноводческие 3 3 3 3
НИИ 1 1 1 1
Обследовано тыс.га 3,043 4,000 3,043 4,000
в т.ч. семеноводческие 0,324 0,300 0,324 0,300
Отобрано образцов тыс. штук 13,468 17,200 13,468 17,200
в т.ч. с семеноводческих посадок, тыс.штук. 2,592 2,400 2,592 2,400

При анализе почвенных образцов цисты золотистой картофельной не выявлены.В частном секторе проведено первичное обследование 1544 приусадебных участков на выявление золотистой картофельной нематоды. Из них, в 349 приусадебных участков выявлены цисты золотистой картофельной нематоды. Для подтверждения образцы цист были направлены в Алтайскую зональную лабораторию по карантину растений. Результаты экспертизы Алтайской зональной лаборатории по карантину растений подтвердили выявление золотистой картофельной нематоды. Силами специалистов отдела надзора в области карантина растений осуществлялся контроль за соблюдением мероприятий по локализации и ликвидации золотистой картофельной нематоды. Проведен отбор и анализ контрольных почвенных образцов с 288 приусадебных участков, на которых подтвердилось выявление золотистой картофельной нематоды (таблица 3).

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11


Copyright © 2012 г.
При использовании материалов - ссылка на сайт обязательна.